暗視野顯微鏡也是生物顯微鏡的一種延續(xù)，通過(guò)改變聚光鏡的使用和光路的改變使用通過(guò)觀察試樣的觀察中散射通過(guò)觀察光（光束），高對(duì)比度超微結(jié)構(gòu)技術(shù)觀察那個(gè) 光學(xué)和電子顯微鏡中使用的一種技術(shù)。

在普通光學(xué)顯微鏡（明場(chǎng)照明）的情況下，放置在照明光顏色（燈泡顏色，暖白色等）的明亮背景中的樣品會(huì)阻擋該光并觀察到比背景暗的狀態(tài)。另一方面，暗視野分光鏡從傾斜方向照射，使得光不進(jìn)入物鏡，并觀察由樣品散射的光。在這種情況下，明亮的樣品出現(xiàn)在深色背景上并被觀察到。這種照明方法稱為暗場(chǎng)照明。

 暗視野顯微鏡為了通過(guò)這種方法進(jìn)行觀察，通常使用帶有專用暗場(chǎng)聚光鏡的光學(xué)顯微鏡。對(duì)于生物顯微鏡，可以使用便宜的干式聚光鏡和油浸式聚光鏡來(lái)提供更明亮的照明。還有一種使用相差電容器進(jìn)行暗場(chǎng)觀察的技術(shù)。通過(guò)用學(xué)習(xí)顯微鏡或體視顯微鏡從被檢體側(cè)面用閃光燈發(fā)出的光來(lái)進(jìn)行暗場(chǎng)觀察是可能的。

暗視野顯微鏡效果通過(guò)暗視野顯微鏡果蠅的胚胎觀察的例子。在明亮的視野中可以看到難以觀察到的精細(xì)結(jié)構(gòu)。

暗場(chǎng)顯微鏡的**優(yōu)勢(shì)在于，它可以輕松，廉價(jià)地檢查低對(duì)比度，超細(xì)結(jié)構(gòu)，微病原體和微劃痕的樣品。此外，由于不需要諸如熒光染色的操作，因此不會(huì)發(fā)生由于該操作而導(dǎo)致的偽影。

但是，暗場(chǎng)照明方法僅易于觀察精細(xì)結(jié)構(gòu)，而不能提高分辨率（分辨率）本身。分辨率取決于數(shù)值孔徑。應(yīng)該注意的是，暗視野光譜儀僅用具有高數(shù)值孔徑分量的光進(jìn)行照明，因此不能使用具有高數(shù)值孔徑的物鏡（小于NA.0.8）。

另外，基本上不能使用具有厚度的樣品（在落射照明的情況下，存在使用具有遮光狹縫的物鏡，照明鏡和暗視野照明機(jī)構(gòu)的方法）。

此外，作為設(shè)備的限制，為了獲得明亮的圖像，需要高亮度照明（盡管不如相襯顯微鏡那么多）。

暗視野顯微鏡原理

載玻片上的樣品會(huì)引起散射（主要是Mie散射），對(duì)照明光的衍射和反射。在暗視野照明中，由于照明光被限制在較高的數(shù)值孔徑分量（圓錐形外周表面結(jié)構(gòu)）中，因此該散射光基本上進(jìn)入物鏡。

暗場(chǎng)聚光鏡基本上是普通的顯微鏡聚光鏡，其膜片葉片附著在太陽(yáng)上，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單。因此相對(duì)便宜。

在使用可見光的光學(xué)顯微鏡中，根據(jù)光的波長(zhǎng)，理論上分辨率被限制在大約200 nm。即使不可能在更接近分辨率的兩個(gè)對(duì)象之間進(jìn)行區(qū)分，也可以檢測(cè)尺寸小于分辨率的對(duì)象或檢測(cè)小于分辨率的運(yùn)動(dòng)。由于容易獲得高對(duì)比度圖像的特征，暗場(chǎng)顯微鏡通常用于檢測(cè)這種精細(xì)結(jié)構(gòu)和精細(xì)運(yùn)動(dòng)。對(duì)于這種先進(jìn)的暗場(chǎng)觀察，不僅使用了暗場(chǎng)聚光器，而且還使用了激光傾斜照明，通過(guò)光的全反射在界面處形成的field逝場(chǎng)進(jìn)行照明，通過(guò)錐形透鏡進(jìn)行照明。

作為類似的方法，存在從傾斜方向進(jìn)行照明的“傾斜照明”。在這種情況下，照明的方向性應(yīng)被稱為暗場(chǎng)照明，并且存在一種裝置，該裝置在普通的明場(chǎng)聚光器中結(jié)合了傾斜照明機(jī)構(gòu)，并且可以通過(guò)一次觸摸而切換到傾斜照明模式。

如果使用相差顯微鏡用的聚光鏡和數(shù)值孔徑小的物鏡，則可以容易地實(shí)現(xiàn)暗場(chǎng)分光鏡。

由于用熒光顯微鏡觀察會(huì)切出背景光而僅觀察到激發(fā)光，因此不可避免地要進(jìn)行暗視場(chǎng)顯微鏡檢查。

在掃描電子顯微鏡中，選擇性檢測(cè)衍射波并以高對(duì)比度觀察二次電子的技術(shù)稱為暗場(chǎng)觀察。這是通過(guò)調(diào)節(jié)物鏡孔徑的位置并順便用電子束掃描束來(lái)完成的。

在X射線攝影中，通過(guò)檢測(cè)X射線的折射來(lái)觀察高對(duì)比度的物體的技術(shù)被稱為“ X射線暗場(chǎng)法”，并且正在被研究。

一些光學(xué)小鼠使用暗視野顯微鏡。這種類型的鼠標(biāo)也可以在透明玻璃或光滑表面（例如大理石或漆）上使用。以上就是暗視野的用處，具體不明可以咨詢上海譜騫光學(xué)儀器有限公司技術(shù)部021-57632373