革蘭染色法

自然界存在多種多樣病菌，如何將這些病菌加以鑒別、分類，并選擇有效藥物進(jìn)行治療這是很重要的問題。革蘭氏染色法，能夠把細(xì)菌分為兩大類：采用這種染色方法，是先用龍膽紫（亦稱結(jié)晶紫）來染病菌，所有細(xì)菌都染成了紫色，然后再涂以革蘭氏碘液，來加強(qiáng)染料與菌體的結(jié)合，再用95％的酒精來脫色20～30秒鐘，有些細(xì)菌不被脫色，仍保留紫色，有些細(xì)菌被脫色變成無色，最后再用復(fù)紅或沙黃復(fù)染1分鐘，結(jié)果已被脫色的細(xì)菌被染成紅色，未脫色的細(xì)菌仍然保持紫色，不再著色，這樣，凡被染成紫色的細(xì)菌稱為革蘭氏陽(yáng)性菌(G﹢菌) 染成紅色的稱為革蘭氏陽(yáng)性菌(G-菌) 革蘭氏染色法的意義就在于鑒別細(xì)菌，把眾多的細(xì)菌分為兩大類，革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌。大多數(shù)化膿性球菌都屬于革蘭氏陽(yáng)性菌，它們能產(chǎn)生外毒素使人致病，而大多數(shù)腸道菌多屬于革蘭氏陰性菌，它們產(chǎn)生內(nèi)毒素，靠?jī)?nèi)毒素使人致病。在治療上，大多數(shù)革蘭氏陽(yáng)性菌都對(duì)青霉素敏感（結(jié)核桿菌對(duì)青霉素不敏感）；而革蘭氏陰性菌則對(duì)青霉素不敏感（但奈瑟氏菌中的流行性腦膜炎雙球菌和淋病雙球菌對(duì)青霉素敏感），而對(duì)鏈霉素、氯霉素等敏感。所以首先區(qū)分病原菌是革蘭氏陽(yáng)性菌還是陰性菌，在選擇抗生素方面意義重大。

革蘭氏染色的結(jié)果取決于細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)即革蘭氏染色原理為

G﹢菌：細(xì)胞壁厚，肽聚糖網(wǎng)狀分子形成一種透性障，當(dāng)乙醇脫色時(shí)，肽聚糖脫水而孔障縮小，故保留結(jié)晶紫-碘復(fù)合物在細(xì)胞膜上。呈紫色。

Gˉ菌：肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮，其脂含量高,乙醇將脂溶解，縫隙加大，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁，沙黃復(fù)染后呈紅色。

BL-160Z科研級(jí)三目攝像生物顯微鏡

革蘭氏染色反應(yīng)

革蘭氏染色反應(yīng)是細(xì)菌分類和鑒定的重要性狀。它是1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立的。革蘭氏染色法（Gram stain）不僅能觀察到細(xì)菌的形態(tài)而且還可將所有細(xì)菌區(qū)分為兩大類：染色反應(yīng)呈藍(lán)紫色的稱為革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，用G+表示；染色反應(yīng)呈紅色(復(fù)染顏色)的稱為革蘭氏陰性細(xì)菌，用G-表示。

細(xì)菌對(duì)于革蘭氏染色的不同反應(yīng)，是由于它們細(xì)胞壁的成分和結(jié)構(gòu)不同而造成的。革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的細(xì)胞壁較厚（20～80nm）主要是由肽聚糖和磷壁酸組成的，僅有一層結(jié)構(gòu)，主要成分為肽聚糖，占細(xì)胞壁干重的50%～90%。在染色過程中，當(dāng)用乙醇處理時(shí)，由于脫水而引起網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中的孔徑變小，通透性降低，使結(jié)晶紫-碘復(fù)合物被保留在細(xì)胞內(nèi)而不易脫色，因此，呈現(xiàn)藍(lán)紫色；革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁中肽聚糖含量低，而脂類物質(zhì)含量高，當(dāng)用乙醇處理時(shí)，脂類物質(zhì)溶解，細(xì)胞壁的通透性增加，使結(jié)晶紫-碘復(fù)合物易被乙醇抽出而脫色，然后又被染上了復(fù)染液(番紅)的顏色，因此呈現(xiàn)紅色。

革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌：金黃葡萄球菌、鏈球菌、腸球菌、利斯特菌……

革蘭氏陰性桿菌：克雷白桿菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、流感嗜血桿菌、沙門氏菌…